已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/02 17:24:10
已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加

已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加
已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!
我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加入酶切位点和保护碱基,后面是取了去掉终止密码子的互补序列,加入酶切位点和保护碱基……(问题:1、除了酶切位点和保护碱基,还有什么需加入什么吗?2、需要在上游序列中加入KOZAK序列吗?其作用是什么?下游也需要吗?3、酶切位点的保护碱基是特定的吗?4、克隆目的基因,必须从ATG开始设计上游引物,终止密码子设计下游引物吗?可不可以从中间或者两侧设计?因为位置若固定的话很难找到合适的引物)……十分紧急,

已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加
1.首先这应该是个融合表达载体.应该考虑后面的读码框问题.就是应该适当在后面的酶切位点前加入0-2个碱基.使得你的目的基因和egfp在同一读码框内.
2.KOZAK序列在真核细胞中表达有作用,这就看你后期的实验目的了.不过不加的话应该只是效果没有加了好,而不是没有效果.下游当然不用加.
3.NEB公司的网站上有特定酶的保护碱基图表.他们应该都是进行过研讨的,所以建议您参考这个.
4.克隆目的基因当然要保证从ATG开始.到终止码结束.这样叫一个完整的CDS区,表达一个完整的功能蛋白.不可以小于这个范围,但是多出来也许可以吧.就是从两侧的UTR区开始设计.但是我不敢保证啊.所以我建议您先在UTR区设计引物,扩出来长片段后再扩增您的目的片段.这样会容易点.
P.S.保护碱基的作用是可以使PCR产物两端的酶切位点被识别,从而可以直接酶切PCR产物使其产生粘性末端,以便进行后续的克隆.这和PCR能否扩增出来没有任何关系.

已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加 分离出一个基因的mRNA,转录获得cDNA,测序后得知该基因发生了点突变,但该基因表达的蛋白功能没有发生改变为什么? 我提取RNA,反转录得到cDNA,我要由此扩增功能基因,请问引物设计时,用查到的mRNA序列,还是用cDNA序列我要克隆一个基因,从NCBI查到该基因近似物种的mRNA(没有查到cDNA).我的路线是先提取RNA,反转录 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列?我想的是,不反转的话设计的引物是和mRNA互补的,而mRNA合cDNA,这样的话设计的引物就不和cDNA互 已知一个cDNA的3'端部分序列,得到该基因的全长cDNA这个基因要先筛选出来才用RACE技术. 已知一个cDNA3'端部分序列,设计实验得到该基因的全部cDNA 已知基因名和cDNA位点,如何找到相对应的DNA序列上的位点?例:已知基因名PLEC,NM_201384,exon1,c.14A>G.现在要验证c.14A>G这个位点是否发生突变.我在NCBI中可以查到这个基因相对应的mRNA的序列,可以以 cDNA文库和部分基因文库的区别cDNA文库就是部分基因文库吧? mRNA所携带的遗传基因是此生物全部的遗传基因么?CDNA文库包含的到底是什么? 关于S1核酸酶作图法;核酸保护实验S1核酸酶作图法,基因长度900bp左右,我想用基因组DNA的PCR产物和总mRNA或单链总cDNA杂交,用S1核酸酶消化,目的是明确该基因的外显子.问题是有人质疑说900bp的 cDNA文库与基因组文库相比,后者具有的特点是?A没有启动子和内含子B含有生物的全部基因C全部基因可以在物种间交流D通过mRNA逆转录形成的基因 mRNA长度怎么比cDNA短这是在NCBI查的人ifn-beta基因(表达一种干扰素的一个基因),显示是说是mRNA序列,我想要它的CDS,结果下面显示的CDS为什么比它的mRNA序列还短?一个1145bp,一个只有639bp?错了 题 我想问,转录得到的mRNA上面,有多少个基因.意思是,比较两个mRNA,它们应该会有多个基因不同吧?一个DNA分子,是转录出一条mRNA呢?还是转录成很多截儿mRNA? 如何进行目的基因和目的的cDNA的筛选? 为什么cDNA文库的基因没有启动子和终止子 cDNA文库和基因组文库中基因来源的区别 全长基因克隆和cDNA全程克隆之后,下一步都是什么?我现在有很多的困惑,我克隆了一个基因的全长,然后又克隆了它的cDNA的全长,我想知道,两种克隆下来可以继续做什么实验,能得到什么样的结 利用逆转录酶和mRNA模版合成cDNA的主要步骤是什么